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马媾疫琼脂扩散沉淀反应

发布时间:2018-02-05 22:53:07   来源:   标签:马媾疫琼脂扩散沉淀反应
内容提要: 1.沉淀原的制备自病马采取病料,接种于公兔的睾丸实质中,继代数次;当在兔外周血液出现虫体时,采血接种到犬。在人工感染犬后的第三天,给犬进行摘牌手术,术后,检查犬血,当以其外围血作压滴标本检查,600倍镜下,每个视野虫体量达到150条以上时,即可放血,加2..

 

1.沉淀原的制备

自病马采取病料,接种于公兔的睾丸实质中,继代数次;当在兔外周血液出现虫体时,采血接种到犬。在人工感染犬后的第三天,给犬进行摘牌手术,术后,检查犬血,当以其外围血作压滴标本检查,600倍镜下,每个视野虫体量达到150条以上时,即可放血,加2%柠檬酸钠生理盐水以抗凝,离心沉淀;沉淀后吸取上层白色含虫层,混悬于生理盐水中,再沉淀;如此反复多次,得较纯的虫体沉淀物。将沉淀物放乳钵中研磨4小时,放人振荡瓶中,加小玻璃珠,在振荡器上振荡8小时。按1 :9比例加生理盐水。最后按其量加人0.1 %。的硫柳汞防腐,保存于冰箱中。此即沉淀原。

2.琼脂凝胶板的制备

在蒸馏水中加人5%琼脂,高压蒸汽下使溶解;冷凝后,切取上层透明部分,切成碎块,在蒸馏水中漂洗2-3天,每天换水2-3次,最后将水拧干,保存于冰箱内。 做琼脂凝胶板时,取以上凝胶块150克,加水500毫升,溶解,使含琼脂1 .5%,再加人氯化钠,使含量达0.85%,和硫柳汞,使含0.1 %。的高压灭菌后,倒人平皿内,使琼脂厚度约为5毫米。现已有纯琼脂粉供直接制琼脂板使用。琼脂凝固后,在琼脂板上以直径8毫米的打孔器打孔。-般在皿的正中打一孔,而后以4毫米的距离在中央孔的周围打6个孔,使成梅花状。

3.操作方法

将皿上各孔编号;以吸管吸取抗原0.2毫升,注于中央孔内,然后向周围四孔加人待检血清0.2毫升。留下二孔,一孔加已知阳性血清,一孔加已知阴性血清为对照。如此,每一平皿可检查可疑病畜4头。将琼脂板放人25-28℃温箱内,24小时后,取出检查,阳性者可在血清孔与抗原孔之间的琼脂板上出现一条白色沉淀。

 

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